技術

GPCR活性アッセイにはCa²⁺ アッセイ、cAMPアッセイ、βアレスチンアッセイ、レポータージーンアッセイなど様々な手法がありますが、共役するGαタンパク質のサブタイプにより使い分けねばならない、時間とコストが膨大に掛かるといった欠点がそれぞれにあり、決定打に欠けていました。網羅的で高感度高信頼性の当社アッセイ系はGPCR創薬の悩みを一気に解決します。

GPCR標的薬数ランキング

解説ページ「GPCRについて」に示したように、医薬品標的としての開発度合いはそれぞれのGPCRで大きく異なります。一部のGPCRには市販薬が何十もある一方、大多数のGPCRに…

Tanso Biosciences

GPCR創薬の主な障壁のひとつは次の通り研究、創薬を支える優れたアッセイ系が存在しないことにあります。

• GPCRの結合実験は偽陽性、偽陰性が多くあてにならない。
• GPCR活性測定法の決定打がない。
  • レポーターアッセイ以外の活性測定法は高コスト、煩雑、HTSへの拡張が困難。例）Western blotting
  • レポーターアッセイで安定して活性を測定できるのは一部のGPCRのみ。特にG12/13、Gi/oシグナル検出の再現性、安定性が低い。

そこで当社はGPCR創薬の壁を打破し新薬開発を促進するため、既存試験法での活性評価が非常に困難だったGタンパク質サブタイプG12/13, Gi/oの壁を克服し、全GPCRの活性を測定できる画期的技術を開発しました。次特徴があります。

• 主要Gαタンパク質に共役する全てのGPCRに対応
• オーファン受容体の活性評価も現実的に可能
• 作動薬、拮抗薬、逆作動薬、 PAM、NAMを同定可能
• 業界最大規模313種のヒトGPCRの取り揃え
• これまでになく高感度、高S/B比

高感度で汎用的なアッセイ用細胞、 Gαタンパク質カクテル、全ヒトGPCRライブラリーから成ります。

試験用細胞

• Gタンパク質下流シグナルを増幅する人工遺伝子回路を細胞に組み込み、主要なGαタンパク質に共役するあらゆるGPCRに対して従来の活性測定法より格段に高感度、高S/B比
  • G12/13共役受容体
  • Gi/o共役受容体
  • Gs共役受容体
  • Gq共役受容体
• リガンド既知GPCRの99%で良好な応答を確認済（ 210種中208種）
• 受容体チロシンキナーゼ等GPCR以外の細胞膜受容体に拡張可能
• 東京大学から国際特許出願中（公開番号 WO/2020/026979）。当社に仮専用実施権設定済

Gαタンパク質カクテル

Gαタンパク質3種のカクテル。試験用細胞に強制発現することにより、共役するGαタンパク質が不明なGPCRを活性評価可能にする、オーファン創薬の強力な武器。リガンド既知GPCRの95%で良好な応答を確認済。

網羅的GPCRライブラリー

感覚受容体を除くGPCRを網羅した業界最大級の受容体ライブラリー。ネイティブの遺伝子配列なので本来の受容体活性を評価できます。

• ヒト リガンド既知受容体 218、オーファン受容体 95、計 313受容体
• マウス リガンド既知受容体 212、オーファン受容体 64、計 276受容体
• 他種受容体に拡張中

GPCRカタログ

ヒト 300種、マウス 250種、計550種の当社取扱GPCRについて、濃度反応曲線、対応パネル一覧など情報満載

Tanso Biosciences

当社アッセイ系が多様な受容体に対し複数の既存試験法と整合性のある結果を出し、感度、S/B比、再現性が高いことが示されました。

当社試験系で測定したGPR91のアゴニスト応答は、既存試験法の結果と整合性があり、感度が高いことが示されました。

GPCRのアッセイに用いたのと同じ試験細胞を使用し、GPCRと同じ方法でFlt3を一過性に強制発現しました。

試行を繰り返しても同等な試験結果が得られることは、信頼性の上で非常に重要です。試験を繰り返した際の結果の一貫性を評価するため、β1アドレナリン受容体（ADRB1）に対するイソプロテレノールの濃度依存的活性について、異なる日に3回試験を行いました（図1, 表1）。それぞれの試験のEC50値が非常に近く、再現性が良好であることがわかります。

次に、試験実施者による結果のばらつきも評価しました。1型アンギオテンシン2受容体（AGTR1）のアゴニストモード（図2, 表2）、アンタゴニストモード（図3, 表3）のいずれにおいても、異なる試験実施者による結果がほぼ一致していることが示されました。